體外肌肉功能測試的技巧

肌肉的外科切除和縫合

有兩種主要的方法處理感興趣的肌肉。第一種是通過手術切除肌肉，并將其放入一盤林格溶液中，然后將任何外科縫線連接到肌腱上；另一種方法是在肌腱周圍縫合，然后在直接轉移到浴室之前切斷打結的遠端。

上述方法的優點是可以相對快速地將肌肉從動物體內移除。這意味著在移除肌肉的同時不需要麻醉動物。可以簡單地對動物通過手術切除肌肉。為了縫合肌肉的肌腱，必須將肌肉轉移到裝滿冷凍林格溶液的盤子中。

而缺點是需要用二氧化碳(95%O2/5%CO2)，這可能需要準備一些額外的裝置來進行灌注。此外，肌肉必須通過肌腱固定在兩端。這一步驟可能很有挑戰性，而且可能很難可靠地固定肌肉，使其保持在接近靜止長度的位置。優點則是，當準備開始實驗時，能夠將針相對于肌肉位置放置以形成縫合環，這將使連接到系統上變得更加容易。在進行初步測量后，可以確保環路始終具有正確的尺寸，以理想地適合腔室。

肌腱的替代方法（如上所示）不一定需要對動物進行麻醉。事實上，由于制作縫合結需要額外的時間，在隔離肌肉的同時麻醉動物可能是有用的。此外，盡管肌肉將通過動物自身的血液供應保持活力，但暴露在外的肌肉應定期用林格溶液沖洗，以防止其干燥。這種技術的優點是，肌肉以正常的靜止張力固定在適當的位置，一旦肌腱暴露出來，就可以更容易地打結。根據肌肉肌腱的可及性（比如膝關節處），在沒有打結滑動的情況下切斷肌腱并將肌肉從體內移除可能會更困難。在此步驟中要特別小心。

采用這種方法也會使準備縫合環變得有點困難，建議在手術過程中用卡波金在組織浴中灌注林格溶液，這樣在實驗過程中就不會出現肌肉活力的問題。進行這種手術沒有對錯之分，但在手術的每一步都應該注意這些細微差別，以確保最佳效果。

使用“S"形掛鉤連接

將細線彎曲成S形，可以通過連接到Aurora Scientific 1200A系統的雙模桿的桿臂末端鉤住，而無需任何額外的粘合劑或固定。底鉤可以擰入800A的下組織夾中。它不一定需要是“S"的形狀，但如果在兩端都有一個彎曲部分，中間有一個直的部分，則可以使用該彎曲部分來幫助將鉤子更牢固地鎖定在夾子中。

為形成鉤子，建議使用0.012"的短不銹鋼絲。一旦切割好金屬絲，建議使用內六角扳手形成彎曲，1.5或2 mm是合適的尺寸。當鉤子固定在系統中的適當位置時，將肌肉轉移到浴槽。建議先用鉗子在頂部固定，這樣重力會讓肌肉和另一個環自然下垂，而不是必須向上拉才能固定另一個。這將降低意外過度拉伸肌肉或將結從肌腱中拔出的風險。

連接縫合環后，應該升高組織浴槽，將肌肉浸入充氧林格溶液中，并在肌肉上設置一些適當的張力。在施加這種靜止張力時，一定要觀察縫合結是否牢固。最終結果應該類似于下圖。

均衡周期與優化

在實驗開始之前，肌肉應該在浴槽中放一段時間，保持接近其理想的張力，以平衡其新環境。該平衡期通常為約10-15 min。平衡已經發生的一個跡象是肌肉的靜止張力基線的穩定。

一旦肌肉達到平衡，通過設置701C電刺激儀的超最大刺激電流來開始實驗。建議使用恒流與恒壓模式。對于這一步，設置電流的簡單方法是通過615A動態肌肉控制和分析軟件中的InstantStim功能觸發一系列抽搐。抽搐軌跡可以通過實時數據監視器輕松可視化，一旦電流穩定下來就可以停止調整電流。在這個電流之上增加10%作為安全系數不會傷害肌肉。

有了超分子電流組，開始拉伸肌肉，以找到其理想長度Lo。由于無法輕易觀察肌肉中的肌節間距，因此確定Lo的簡單方法是以循序漸進的方式緩慢拉伸肌肉，并在每走一步后引發抽搐收縮。當力的包絡是最大值（峰值力和基線之間的差）時，達到Lo，因此肌節間距也應該是最佳的。為此，議使用DMC LabBook軟件中的準備實驗窗口。一旦找到峰值，就可以開始主要的一組實驗。注意，對于大多數肢體肌肉來說，理想的長度接近松弛長度，所以在這個過程中要注意不要過度拉伸肌肉。